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PCR反应问题解答(三)扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散
2024-07-26  来源:上海抚生实业有限公司

3. 扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散


(1)酶量过高。减少酶量;酶的质量差,调换另一来源的酶。


(2)dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。


(3)MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。


(4)模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。


(5)引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。


(6)循环次数过多;增加模板量减少循环次数至30,缩短退火时间及延伸时间,或改用二种温度的PCR循环。


(7)退火温度过低。


(8)电泳体系有问题:


    ①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大;


    ②凝胶没有凝固好;


    ③琼脂糖质量差。


(9)若为PCR试剂盒则可能:


    ①由于运输储存不当引起试剂盒失效;


    ②试剂盒本身质量有问题,如引物选择、循环参数等选择不当。


(10)降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。

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