一、概要

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol）又称呕吐毒素（Vomitoxin）属于霉菌的单端孢菌素族，由某些镰刀霉真菌属产生。呕吐毒素多分布于小麦、大麦、玉米等谷物籽实中，含量通常是mg/kg级的，由于他们高的细胞毒素及免疫抑制性质，对人类及动物构成了健康威胁。

本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度。



二、试验原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被呕吐毒素抗原，样本中的呕吐毒素和微孔条上预包被的抗原竞争抗呕吐毒素抗体，加入酶标二抗，经TMB底物显色，样本吸光度值与其所含呕吐毒素量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中呕吐毒素的含量。



三、适用范围

可定性、定量检测，本试剂盒适用于小麦、大麦、玉米、饲料等样本中呕吐毒素的含量检测。

四、交叉反应率

呕吐毒素…………………………………………………100%



五、测定前应须知：

1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20~25℃）。

2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。

3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。



操作步骤：

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20~25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2~8℃。

3、洗涤工作液在使用前也需回温。

4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、 加标准品/样本：加标准品/样本50l/孔到对应的微孔中，再加入呕吐毒素酶标物50l/孔，最后加入呕吐毒素抗试剂50l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。

6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250l/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

7、显色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15～20min。

8、测定：加入终止液50l/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。



六、检测方法灵敏度、准确度、精密度

试剂盒检测下限：10ppb

样本最低检测限：

啤酒………………………………………………………10ppb

玉米、花生等粮食作物及饲料…………………………200ppb

小麦、麦芽………………………………………………100ppb

回收率：

啤酒……………………………………………… 90±10%

玉米、花生等粮食作物及饲料…………………………85±15%

小麦、麦芽………………………………………………85±10%

精密度：试剂盒的变异系数均小于10%



七、注意事项

1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20~25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、每加一种试剂前需将其摇匀。

4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6、储存条件:保存试剂盒于2~8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15~20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min（或更长）。反之，则减短反应时间。

9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。

10、该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。



八、贮藏条件及保存期

贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。

保存期：该产品有效期为12个月。