一、概要

恩诺沙星（ENR）作为一种氟喹诺酮类物质，能抑制细菌DNA螺旋酶活性，常用于治疗家畜禽感染性疾病。随着ENR的大量使用，残留于畜禽可食组织中的ENR及其代谢产物环丙沙星（CIP）引发了严重公共卫生问题。

恩诺沙星ELISA检测试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度。



二、试验原理

恩诺沙星ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被恩诺沙星抗原，样本中残留的恩诺沙星和微孔条上预包被的抗原竞争抗恩诺沙星抗体，加入酶标二抗后，经TMB底物显色，样本的吸光值与其残留物恩诺沙星的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中残留物恩诺沙星的含量。



三、适用范围

恩诺沙星ELISA检测试剂盒可定性、定量检测肌肉、肝脏、蜂蜜等样本中恩诺沙星的残留量。



四、交叉反应率

恩诺沙星  ………………………………………………100 %



五、检测步骤

测定前应须知：

1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。

2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。

3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。

操作步骤：

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）回温30min以上，注意每种液体试剂使用前均须轻轻摇匀。

2、取出所需数量的微孔板，将不用的微孔放入带有干燥剂的锡箔袋中，保存于2～8℃。

3、洗涤工作液在使用前也需回温。

4、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置。

5、加标准品/样品：加标准品/样品50ml/孔到对应的微孔中，然后加入抗试剂50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。

6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250ml/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10~20s，用吸水纸拍干（拍干后若有气泡可用未使用过的枪头戳破）。

7、加酶标物：加入酶标物100ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min，取出重复洗板步骤6。

8、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min。（如颜色较浅可适当延长此步的反应时间）

9、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。



六、检测方法灵敏度、准确度、精密度

试剂盒灵敏度：0.5ppb

样品最低检测限：

肌肉样品………………………………………1ppb

肝脏样品………………………………………2ppb

蜂蜜样品……………………………………………2ppb

回收率：

肌肉样品………………………………………80±10%

肝脏样品………………………………………75±15%

蜂蜜样品………………………………………85±10%

精密度：试剂盒的变异系数均小于10%



七、注意事项

1、室温低于20℃或试剂及样品没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、每加一种试剂前需将其摇匀。

4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6、储存条件

保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进锡箔袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

7、试剂变质的迹象

发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min，但不得超过30min。反之，则减短反应时间。

9、恩诺沙星ELISA快速检测试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。



八、贮藏条件及保存期

贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。

保存期：  该产品有效期为12个月。